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當(dāng)前位置：培養(yǎng)基的制備和滅菌
一 1 2、掌握各種實(shí)驗(yàn)室滅菌方法及技術(shù) 二 培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng) 三 1 2 四、操作步驟 基本流程：稱藥品→溶解→調(diào)pH值→融化瓊脂→過濾分裝→包扎標(biāo)記→滅菌→擺斜面或倒平板 1 根據(jù)培養(yǎng)基配方及配制量依次準(zhǔn)確稱取各種藥品，放入適當(dāng)大小的燒杯中 2 3、調(diào)節(jié)pH 4 5 6、包扎標(biāo)記 7、滅菌 培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌。普通培養(yǎng)基為121℃ 20min，以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后 7.1高壓蒸汽滅菌法 7.2操作方法和注意事項(xiàng)如下 : 打開排氣口（也叫放氣閥）。分別設(shè)定所需滅菌溫度和時(shí)間（鍋體上的定時(shí)器為一壓控開關(guān)）。接通電源加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí)，維持5min，使鍋內(nèi)冷空氣*排凈。 8、無菌檢查 將已滅菌培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24~48小時(shí)，以檢查滅菌是否*。 本實(shí)驗(yàn)分離用培養(yǎng)基的配方: A．1/5NB培養(yǎng)基（各成分取1/5） 營養(yǎng)肉湯（nutrient broth）培養(yǎng)基（1L）： 牛肉膏（beef extract） 3g /l； 蛋白胨 （soy peptone） 5g /l； pH 7.0 B．喹啉降解菌分離用培養(yǎng)基 單位 g/L Na2HPO4 1.6 KH2PO4 1.0 NH4Cl 0.5 K2SO4 0.06 CaCl2·2 H2O 0.025 MgCl2·6 H2O 0.1 NaHCO3 0.42 EDTA·Na2 0.015 FeSO4·7H2O 0.0015 D-BIOTIN 0.010 KNO3 0.505 配制時(shí)每一成分逐一溶化，否則會(huì)產(chǎn)生沉淀。 以喹啉作為*碳源時(shí)，喹啉的加入量為0.5～2 mmol/L（或40ul/L～150ul/L）。對(duì)于固體培養(yǎng)基，喹啉的加入量為每塊平板2ul～10ul喹啉（置于培養(yǎng)基表面）。 *喹啉要在培養(yǎng)基滅菌后加入 制備固體分離培養(yǎng)基時(shí)需加入1.5g agar/100ml培養(yǎng)基 C．反硝化富集培養(yǎng)基 單位 g/L Na2HPO4 1.6 KH2PO4 1.0 NH4Cl 0.5 K2SO4 0.06 CaCl2·2 H2O 0.025 MgCl2·6 H2O 0.1 NaHCO3 0.42 EDTA·Na2 0.015 FeSO4·7H2O 0.0015 D-BIOTIN 0.010 KNO3 0.505 乙酸鈉 1 酒石酸鈉鉀 2 * 喹啉（苯酚） 40ul（300mg） 配制時(shí)每一成分逐一溶化，否則會(huì)產(chǎn)生沉淀。 *喹啉（苯酚）要在培養(yǎng)基滅菌后加入 制備固體分離培養(yǎng)基時(shí)需加入1.5g agar/100ml培養(yǎng)基。 D. 1/10TSA（Tryptic soy agar）培養(yǎng)基（各成分取/10）： 胰蛋白胨 15 g/l, 大豆胨 （Soytone） 5 g/l, NaCl 5 g/l, 瓊脂 15 g/l E．苯酚降解菌分離用培養(yǎng)基 單位 g/L Na2HPO4 1.6 KH2PO4 1.0 NH4Cl 0.5 K2SO4 0.06 CaCl2·2 H2O 0.025 MgCl2·6 H2O 0.1 NaHCO3 0.42 EDTA·Na2 0.015 FeSO4·7H2O 0.0015 D-BIOTIN 0.010 KNO3 0.505 配制時(shí)每一成分逐一溶化，否則會(huì)產(chǎn)生沉淀。 以苯酚作為*碳源時(shí)，苯酚的加入量為200～800 mg/L。 苯酚要在培養(yǎng)基滅菌后加入 制備固體分離培養(yǎng)基時(shí)需加入1.5g agar/100ml培養(yǎng)基。 F．R2A培養(yǎng)基 酵母提取物 0.50 g /l 胰蛋白胨 0.25 g /l 大豆胨 （Soytone） 0.25 g/l, 酸水解酪素 0.50 g /l 葡萄糖 0.50 g/l 可溶淀粉 0.50 g /l 丙酮酸鈉 0.30 g/l K2H PO4 0.30 g/l MgSO4·7H2O 0.05 g/l 瓊脂 15.00 g /l 在加入瓊脂前用結(jié)晶的磷酸氫鉀或磷酸二氫鉀調(diào)整zui終PH值為7.2。加入瓊脂后，加熱培養(yǎng)基使其沸騰，瓊脂溶解后在121℃高壓滅菌15分鐘。 LB液體培養(yǎng)基配方 蛋白胨 10g 酵母粉 5g NaCl 10g H2O 1000ml pH7.2 電話 微信掃一掃
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)
任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)*滅菌
用量筒取一定量（約占總量的2/3）蒸餾水倒入燒杯中，在電爐上小火加熱
根據(jù)培養(yǎng)基對(duì)pH的要求
固體或半固體培養(yǎng)基須加入一定量瓊脂
分裝時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾染在管口或瓶口，以免引起污染
培養(yǎng)基分裝后加好硅膠塞或試管帽。在在瓶壁或管壁上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱，制備組別和姓名、日期等。
高壓蒸汽滅菌用途廣
7.2.1 加水
打開滅菌鍋蓋
7.2.2 裝料
滅菌材料放好后
7.2.3 排氣
7.2.4 升壓、保壓和降壓
當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí)，滅菌鍋?zhàn)詣?dòng)控制加熱開關(guān)以維持恒溫，待設(shè)定時(shí)間到達(dá)（一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃，20min）后，自動(dòng)停止加熱，待壓力降至接近“0”時(shí)，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會(huì)由于瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外。
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