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大鼠轉移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 檢測試劑盒說明書

更新時間：2010-11-16 | 點擊率：2677

詳細介紹：

大鼠（Rat）轉移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用標本：血清或血漿

試驗原理：
TGF-β1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知TGF-β1濃度的標準品

、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測

。先將TGF-β1和生物素標記的抗體同時溫育

。洗滌后

，加入親和素標記過的HRP

。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物

，然后加入底物A

、B，和酶結合物同時作用

。產生顏色

。顏色的深淺和樣品中TGF-β1的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋 1塊半塊即用型
標準品：400pmol/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml）即用型
生物素標記的抗TGF-β1抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml）即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型

自備材料
1．蒸餾水

。
2．加樣器：5ul

、10ul、50ul

、100ul

、200ul、500ul

、1000ul

。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A

、B

。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗

。
2．實驗中不要吃喝

、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份

。

操作注意事項
1．試劑應按標簽說明書儲存

，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄

，不可保存

。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存

，以免變質

。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好

。不同批號的試劑不要混用。保質前使用

。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染

，吸取終止液和底物A、B液時

，避免使用帶金屬部分的加樣器

。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品

。
6．洗滌酶標板時應充分拍干

，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．底物A應揮發(fā)

，避免長時間打開蓋子

。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下

。避免用手接觸，有毒

。實驗完成后應立即讀取OD值

。
8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣

。
9．按照說明書中標明的時間

、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集

、處理及保存方法
1

、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管

。收集血液后

，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2

、血漿-----EDTA

、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測

。1000×g離心30分鐘去除顆粒

。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物

。
4

、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存

，避免反復冷凍

。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾

。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍

。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
1．標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備

，不能儲存

。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
400 pmol/L （6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

。
200 pmol/L （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pmol/L （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pmol/L （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pmol/L （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 pmol/L （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pmol/L （空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul

。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1．使用前

，將所有試劑充分混勻

。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡

，產生加樣上的誤差

。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔

。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定

，能使用復孔的盡量做復孔。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔

、加入待測樣品50ul于反應孔內

。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板

，輕輕振蕩混勻

，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內液體

，每孔加滿洗滌液

，振蕩30秒，甩去洗滌液

，用吸水紙拍干

。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌

，洗滌次數(shù)增加一次

。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻

，37℃溫育30分鐘

。
6．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液

，振蕩30秒

，甩去洗滌液

，用吸水紙拍干。重復此操作3次

。如果用洗板機洗滌

，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A

、B各50ul

，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘

。避免光照

。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液

，加入終止液后應立即測定結果

。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
標準品濃度（pmol/L）
A 400 400 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B 200 200 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C 100 100 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D 50 50 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E 25 25 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F 12.5 12.5 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G 0 0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的

，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果

。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性

。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990

。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內

、板間變異系數(shù)均小于10%。

結果判斷與分析
1

、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的TGF-β1標準品濃度為橫坐標（X）

，做得相應的曲線

，樣品的TGF-β1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。