。稀釋比例按下表中進行：
40 umol/L （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
。
20 umol/L （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 umol/L （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 umol/L （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 umol/L （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.25 umol/L （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 umol/L （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋
。
操作步驟
1． 使用前
，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫
，以免加樣時加入大量的氣泡
，產生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)
。每個標準品和空白孔建議做復孔
。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定
，能使用復孔的盡量做復孔
。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內
。立即加入50ul的生物素標記的抗體
。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育1小時
。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液
，振蕩30秒
，甩去洗滌液，用吸水紙拍干
。重復此操作3次
。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次
。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP
，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘
。
6． 甩去孔內液體
，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒
，甩去洗滌液
，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌
，洗滌次數(shù)增加一次
。
7． 每孔加入底物A、B各50ul
，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育10分鐘。避免光照
。
8． 取出酶標板
，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果
。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值
。
建議使用的實驗方案
標準品濃度（umol/L）
A 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 1.25 1.25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果
。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品
。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990
。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應
。
3. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于10%
。
結 果 判 斷 與 分 析
1
、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）
，相應的5-HT標準品濃度為橫坐標（X）
，做得相應的曲線，樣品的5-HT含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度
。
4、敏感度： 0.1 umol/L
掃一掃，關注微信
當前位置：