。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
。
400 pg/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul
。
操作步驟
1． 使用前
，將所有試劑充分混勻
。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡
，產(chǎn)生加樣上的誤差
。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔
。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定
，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔
、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)
。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板
，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔內(nèi)液體
，每孔加滿洗滌液
，振蕩30秒，甩去洗滌液
，用吸水紙拍干
。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌
，洗滌次數(shù)增加一次
。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育30分鐘
。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒
，甩去洗滌液
，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次
。如果用洗板機(jī)洗滌
，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A
、B各50ul
，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘
。避免光照
。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液
，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果
。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
標(biāo)準(zhǔn)品濃度（pg/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的
，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果
。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性
。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990
。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)
、板間變異系數(shù)均小于10%
。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2
、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）
，相應(yīng)的LEC標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線
，樣品的LEC含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度
。
3、檢測值范圍：0-800pg/ml
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