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大鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間：2010-11-16 | 點(diǎn)擊率：3139

詳細(xì)介紹：

大鼠（Rat）白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA 檢測(cè)試劑盒
本試劑僅供研究使用標(biāo)本：細(xì)胞培養(yǎng)上清液

試驗(yàn)原理：
IL-6試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知IL-6濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將IL-6和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育

。洗滌后

，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌

，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物

，然后加入底物A、B

，和酶結(jié)合物同時(shí)作用

。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-6的濃度呈比例關(guān)系

。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋 1塊半塊即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml）即用型
生物素標(biāo)記的抗IL-6抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml）即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型

自備材料
1．蒸餾水

。
2．加樣器：5ul、10ul

、50ul

、100ul、200

、500ul

、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等

。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A

、B

。一旦接觸到這些液體

，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝

、抽煙或使用化妝品

。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存

，使用前恢復(fù)到室溫

。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存

。
2．實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中

，密封保存，以免變質(zhì)

。
3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好

。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用

。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染

，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器

。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液

。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干

，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水

。
7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子

。底物B對(duì)光敏感

，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸

，有毒

。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應(yīng)一致

，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣

。
9．按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作

。

樣品收集

、處理及保存方法
1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激

。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管

。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離

。
2

、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽

、肝素血漿可用于檢測(cè)

。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3

、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物

。
4、保存------如果樣品不立即使用

，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存

，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血

。如果血清中大量顆粒

，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍

。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

。

試劑的準(zhǔn)備
1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備

，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻

。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

。
400 pg/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。